细菌生长曲线的绘制实验报告|细胞生长曲线的绘制实验报告范文
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篇一:实验五 微生物生长量的测定及生长曲线的绘制
一、实验目的
学习了解微生物生长量测定的方法
学习了解细菌生长曲线的绘制方法
学习掌握血细胞计数板的使用方法
(一)微生物生长量的测定
计数法 重量法 生理指标法
1、显微镜直接计数法
(1)利用血细胞计数板计数
(2)涂片计数
2、活菌菌落计数法
3、滤膜法
(二)细菌生长曲线
将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中,不补充营养物或移去培养物,细菌以二分裂方式繁殖,以时间为横坐标,细菌数目的对数值为纵坐标,可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线,称为生长曲线(growth curve)
篇二:细胞生长曲线的测定
细胞生长曲线的测定
一、实验目的
掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具
24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法
1. 培养细胞:首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞,计数并记录接种的细胞悬液密度,接种时间记为0小时。
2. 计数细胞密度:从接种时间算起,每隔24小时计数3孔的细胞密度,算出平均值。为提高准确率,对每孔细胞可计数2-3次,如此操作至第七天结束。
3. 绘制曲线:以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标,将全部结果在坐标纸上绘图,即得所培养细胞的生长曲线。
篇三:MTT法绘制生长曲线
实验材料:
1,5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液,5mg/mlMTT溶液,DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管,1.5ml离心管,0.22μm滤膜,锡箔纸,MTT工作液(1ml/管)
实验步骤:
1, 分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液,调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板,每孔接种200μl细胞悬液进行培养(每孔1x104细胞)。
2, 培养16-48后,每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃继续孵育。
3, 孵育4h后终止培养,吸出孔内上清,此时应该倾斜96孔板,用枪头小心的将上清液吸去,不可吸去下面的结晶颗粒,慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min,使结晶充分溶解,于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。
注意事项:
【1】 1, 两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较
分别取两组0,1,3代细胞,制成1x103的细胞悬液,接种到96孔板,每孔细胞悬液200微升,置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育,各组每24小时分别取出4孔,每孔加入MTT(2mg/ml)20微升 37℃孵育,4h后吸弃孔内培养液,每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜,移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值(OD492),以OD(492)值为纵坐标,时间为横坐标绘制生长曲线
【2】 来自:SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养的实验研究
大鼠MSCs生长曲线测定:为了定量测定大鼠BMSCs的生长状况,对来源于同一动物的原代细胞进行连续培养。分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液,调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板,每孔接种200μl细胞悬液进行培养(每孔1x104细胞)。次日起每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃继续孵育4h后终止培养,吸出孔内上清,每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min,使结晶充分溶解,于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。在酶标仪上选择570nm波长,以空白孔调零,测定各孔吸光度(A)值,连续测7天,以时间为横轴,A值为纵轴绘制细胞生长曲线。
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