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　　淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物

　　第十次实验分离产淀粉酶微生物

　　学院：生命科学学院

　　专业：生物科学类

　　年级：20XX级

　　姓名：

　　学号：1007040085

　　20XX年XX月XX日

　　实验十分离产淀粉酶的微生物

　　一、实验目的

　　1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。

　　2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。

　　3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。

　　4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。

　　5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。

　　二、实验原理

　　土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有

　　1、简单单细胞挑取法

　　2、平板分离法和稀释涂布平板法

　　此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括：

　　1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株

　　2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

　　3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。

　　以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。

　　三、实验仪器及试剂

　　1、器材：

　　培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、、天平、滤纸、pH试纸等。

　　2、试剂：

　　配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、NaCl、琼脂、蛋白胨）、淀粉、卢戈氏碘液、蒸馏水、250ml三角瓶中装90ml无菌水加20粒玻璃珠，作稀释用等。

　　3、土样：

　　取自贵州大学农生楼后土壤10g，地下10cm左右。

　　四、实验步骤：

　　1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：

　　1）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基400ml（用于11个平皿和7支试管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g

　　蛋白胨1%……………………………………4g

　　NaCl0.5%…………………………………..2g

　　琼脂2%……………………………………..8g

　　淀粉0.5%........................................2g

　　pH……………………………………7.0~7.2

　　（2）无菌水的制备

　　分别取9ml蒸馏水加入5支试管中，加塞后用报纸包扎捆绑，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。取90ml蒸馏水加入250ml三角瓶中，同样的操作，灭菌备用。

　　（3）器皿的准备

　　将刻度吸管用报纸包扎，培养皿装入专用灭菌杯分别放入高温灭菌箱灭菌备用。

　　2）倒11个平板和7支试管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、灭菌30min.

　　2、制备土壤稀释液：

　　称取土样10g，放入盛有250ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀释度的土壤溶液。

　　3、涂布培养：

　　0.00001、0.000001浓度的土壤稀释液作为涂布平板培养的对象，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基中，共6个培养基，标号，37°C温箱培养48h。

　　4、选取目的菌株：

　　两天后对土壤溶液的微生物培养基进行观察，并取两个菌落形态完全一致的分散的单个菌落，对其中一个喷洒卢戈氏碘液，观察其菌落周围是否出现透明圈，如果出现透明圈说明此菌株产淀粉酶，是目的菌株，记录细菌明显的性状。

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